1. Lựa chọn cột để phát triển kỹ thuật HPLC: Cách tiếp cận để lựa chọn đúng cột giữa các cột khác nhau. Cách tiếp cận bộ công cụ cung cấp một phạm vi xem xét hiệu quả và rộng về khả năng phân tách cho ứng dụng được đánh giá. Sự tách biệt dưới sự phát triển được thúc đẩy bởi sự chọn lọc.
2. Hồ sơ của gradient, chất thêm vào, chất điều chỉnh và bản chất của pha tĩnh là những phần cốt yếu của độ chọn lọc. Các đặc điểm và hỗ trợ của pha tĩnh để xem xét sự chọn lọc.
3. Kỹ thuật đánh giá trực quan cho hiệu suất cột: Đầu tiên, bắt buộc phải biết một vài điều về các mối quan hệ chính trong sắc ký khi thiết kế một thí nghiệm. Bạn phải lấy công suất tối đa để tránh một vụ nổ.
4. Cách thiết lập đầu dò UV: Đầu dò UV thường được sử dụng trong phân tích HPLC, vì chúng được coi là dễ sử dụng và tạo ra dữ liệu hữu ích. Đôi khi, máy dò UV có thể được yêu cầu thực hiện một nhiệm vụ bất thường để có được đường cơ sở tốt hơn, độ nhạy và khả năng tái tạo tốt hơn từ máy dò.
5. Loại và khối lượng của tế bào dòng chảy sẽ tác động đến độ nhạy của kỹ thuật và hiệu quả của các đỉnh. Đặt chiều rộng khe thành chiều rộng hẹp sẽ cải thiện độ phân giải của phổ, băng thông và tham chiếu. Điều quan trọng cần lưu ý là băng thông rộng có lợi thế giảm nhiễu bằng cách trung gian trên một diode có phạm vi lớn hơn. Liên quan: Hệ số đáp ứng tương đối (RRF) và tính toán của nó trong phân tích HPLC
6. Cách pha loãng mẫu ảnh hưởng đến HPLC: Các chất pha loãng mẫu được sử dụng để chuẩn bị mẫu HPLC có thể ảnh hưởng đến hình dạng cực đại và thời gian lưu của HPLC. Để hủy hiệu ứng quá tải, thể tích mẫu được bơm phải thấp hơn thể tích cực đại với khoảng 15%. Các giá trị của đỉnh và độ phân giải phải được lưu ý liên tục để đảm bảo không có hiệu ứng nào xảy ra.
7. Lựa chọn bộ đệm cho tách HPLC: Bộ đệm là một giải pháp chịu được sự khác biệt về độ pH. Nó là một dung dịch nước bao gồm trạng thái cân bằng của hỗn hợp axit yếu và bazơ mạnh hoặc ngược lại. Nhiều yếu tố ảnh hưởng đến việc lựa chọn bộ đệm; ví dụ là độ pH cần thiết của pha động hoặc độ bay hơi của bộ đệm. Nếu bộ đệm được chọn sai, nó sẽ được yêu cầu thêm vào ở nồng độ lớn hơn để hoạt động tốt. Điều này sẽ có xu hướng gây ra các vấn đề liên quan đến sự mạnh mẽ của kỹ thuật.
8. Peak kéo đuôi trong phân tích HPLC: Đây là một trong những biến dạng hình dạng đỉnh thông thường trong sắc ký. Khi độ bất đối xứng cao hơn 1,2, nó là do peak, để tránh peak kéo đuôi cần giảm pH để giảm các tương tác.